Reconstitución
paso a paso

Qué es reconstituir

Los péptidos de investigación se presentan en forma liofilizada: el compuesto activo ha sido congelado y deshidratado hasta convertirse en un polvo o torta sólida dentro de un vial sellado. Esta forma prolonga la vida útil y mantiene la integridad molecular durante el transporte y almacenamiento.

Reconstituir significa disolver ese polvo en un solvente estéril, generalmente agua bacteriostática (BAC water), para obtener una solución líquida lista para medir. El proceso parece simple, pero el orden de los pasos y la técnica de inyección del solvente determinan si la proteína se mantiene intacta o se desnaturaliza.

La regla central: el solvente nunca debe golpear directamente el polvo. Se apunta contra la pared del vial para que el líquido resbale lentamente y disuelva el liofilizado sin shear mecánico. La mezcla por volteo suave completa la disolución, nunca agitación vigorosa.

Materiales necesarios

• Vial liofilizado El péptido en forma de polvo o torta, sellado con tapón de goma.
• BAC water (agua bacteriostática) Agua estéril con 0.9% de alcohol bencílico como conservante. Permite múltiples extracciones del mismo vial sin contaminación.
• Jeringa U-100 (insulina) Para aspirar el volumen exacto de BAC water. La escala U-100 permite medir con precisión de 0.01 mL.
• Swabs de alcohol (isopropanol 70%) Para limpiar los tapones de goma de ambos viales antes de cada punción.
• Superficie limpia Idealmente papel absorbente nuevo. No superficies porosas ni reutilizadas.

Los 10 pasos

Para el flujo interactivo animado con visualizaciones de jeringa, ver el protocolo interactivo en la calculadora. A continuación, la versión en prosa para referencia rápida.

1. 01
   Lavar manos y preparar la superficie.

   Lavado con agua y jabon por al menos 20 segundos. Colocar papel absorbente limpio sobre la superficie de trabajo. Reunir todos los materiales antes de abrir cualquier envase.

2. 02
   Calcular el volumen de BAC water.

   Usar la calculadora para determinar cuantos mL de BAC water añadir al vial segun la concentracion deseada. Anotar el volumen antes de empezar.

3. 03
   Limpiar el tapón del vial de BAC water.

   Frotar el tapón de goma con un swab de alcohol durante 10-15 segundos. Dejar secar al aire, no soplar ni secarlo con tela.

4. 04
   Aspirar el volumen calculado de BAC water.

   Insertar la aguja de la jeringa en el tapón. Extraer el volumen exacto que calculaste en el paso 2. Retirar la jeringa.

5. 05
   Limpiar el tapón del vial de péptido.

   Frotar el tapón con un swab nuevo de alcohol. Dejar secar. Usar siempre un swab distinto para cada vial.

6. 06
   Insertar la aguja y apuntar contra la pared del vial.

   Introducir la aguja en un angulo que apunte hacia la pared interna de vidrio, no hacia el polvo. La punta de la aguja debe quedar por encima del polvo liofilizado.

   Nunca inyectar el liquido directamente sobre el polvo. El impacto mecanico puede desnaturalizar la proteina. El solvente debe resbalar por la pared.

7. 07
   Inyectar lentamente.

   Empujar el embolo de forma continua y lenta, dejando que el BAC water resbale por la pared. No inyectar en pulsos rapidos. El proceso completo debe tomar varios segundos.

8. 08
   Retirar la jeringa y mezclar suavemente.

   Sacar la aguja del tapón. Sostener el vial entre los dedos y hacer movimientos circulares lentos (voltear de lado a lado) durante 20-30 segundos. No agitar vigorosamente, no vortexear.

   La solucion debe quedar transparente o levemente opalescente. Un precipitado denso o color anormal indica posible degradacion. No usar si la apariencia es dudosa.

9. 09
   Verificar la solucion visualmente.

   Revisar contra una fuente de luz. La solucion debe ser limpia, sin particulas visibles ni turbidez marcada. Si hay duda, descartar.

10. 10
    Etiquetar y refrigerar.

    Escribir en el vial: nombre del compuesto, fecha de reconstitucion, y concentracion resultante. Almacenar a 2-8°C. Usar dentro de los 28 dias siguientes. Ver la guia de almacenamiento para detalles.